上海光学仪器厂

复式显微镜的操作

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复式显微镜一般为单眼观察(比较高级的也有双眼同时观察)，放大倍率较解剖显微镜高很多，甚至于千倍。为研究生物学一项不可或缺的工具。

复式显微镜的原理

复式显微镜的镜头都是采用凸透镜来制造，所以有放大功能；放大倍率是目镜和物镜的乘积。因为光线来源是穿透式的，所以观察的材料要切的薄薄的，让光线穿过，才能进行观察，因此，通常我们必须要先将观察的材料做成切片标本。

 
制作标本的工具

盖玻片

载玻片

滴管

镊子

培养皿

刀片

新鲜标本的制作  (以头发为例)

(1) 取干净的载玻片一片

(2) 滴一滴水(不要太多！)

(3) 梳梳头发，在梳子上找一根掉发。

(4) 将头发放在水滴中央。

(5)盖玻片以45°慢慢盖上，避免产生太多气泡，影响观察。

(6) 如果发现盖玻片会浮动，就是水滴太多了，这时拿一张吸水纸靠在盖玻片旁边，将多余的水分吸掉。

(7) 如果气泡太多影响观察，或者是水太少，可以在盖玻片的一侧滴一滴水，在另一侧放吸水纸将水均匀的吸过去。

(8) 做好的标本若要暂时保存，则可以用指甲油将盖玻片的周围封起来。

新鲜标本的观察

1.把做好的玻片标本放在显微镜镜台的中央，中心点对准镜台中央的圆孔。

2.把玻片两端用玻片夹夹住固定。

3.物镜放入10x，旋转旋转盘，调整为最低倍的物镜(通常是4x)，此时放大倍率是40x。

4.光源：

(a)打开显微镜自己的灯源(若没灯源则调整反光镜的位置)

(b)调整光圈的大小，使光线适中。

(c)若是在高倍率下，可以外加灯照。

5.转动粗调节轮，直到玻片距离物镜约1㎝左右，转动细调节轮，直到看得清楚。

6.练习两眼同时张开，以左眼观察(这样右手可直接画图记录，所以若你是惯用左手，就用右眼观察)

7.在低倍镜下找到要观察的东西后，将要观察的东西移至视野中央。

8.更换高倍物镜观察，稍稍转动细调节轮，使视野清楚，如果换成高倍物镜就看不到所要观察的东西，则换回低倍镜下确定所观察的东西在视野中央。

9.光线太暗的处理：

(a)检查显微镜的灯源有没有开(或是反光镜有没有调好)

(b)光圈的大小

(c)标本是不是切得太厚不透光。

10.头发观察的结果：

标本的染色

1.生物的细胞通常是透明无色的，所以加入染色剂可以让我们观察的更清楚。

2. 常使用的染色剂是碘液和甲基蓝液。

3. 方法一：直接滴加一滴染色剂替代水。

4. 方法二：已做好的标本，则可以在盖玻片的一侧滴一滴染色剂，在另一侧放吸水纸将水均匀的吸过去。

金相材料分析与制样过程

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          用金相显微镜如何观察不同金属组织及缺陷呢，以下这个详细制做过种是初学者们最好的学习参考。

一、 实验的主要目的
1.初步学会金相样品制备的基本方法
2.分析样品制备缺陷及防止措施
3.初步认识金相显微镜下的组织特征
4.学习数码照相技术

二、实验概述

   在要检测的材料或零件上截取样品，取样部位和磨面根据分析要求而定，截取方法视材料硬度选择，尺寸以适宜手握为宜。

最常用的取样方法

  粗磨

检验面整平

倒角

粗砂纸磨制

细磨
在一套不同粒度的砂纸上磨制，由粗到细。

更换砂纸时，磨痕方向与上道垂直，砂粒勿带入下道。

磨向要长、用力匀，样品与砂纸紧密接触

抛光：电解抛光、化学抛光、机械抛光、复合抛光等

抛光材料
抛光粉

抛光布

抛光液、抛光膏等

抛光机使用方法与注意事项
1.开机前，检查并放好抛光布，压布圈、环形盖。
2.按抛光机开关面版上的指示方向，打开开关或按钮，
 抛光盘转动平稳后进行抛光
3.抛光时，头要抬高，以防样品飞出伤人。
4.注意安全。

抛光方法

选择抛光粉
配制抛光溶液，比例大约为10—15%。
打开抛光机开关或按钮，
手握紧样品放在盘半径约一般处抛光。
边抛光边加入少量的抛光液。
注意若抛光液浓度不均匀，振动瓶子，数秒后加入。
一般的材料用Cr203绿粉、帆布粗抛光即可。
特殊样品要用Fe2O3红粉、丝绒细抛光。
样品表面抛好后，光亮如镜，干净干燥可腐蚀。
       否则重抛光或用水冲洗，用酒精冲洗，吹干腐蚀

 
其它磨抛设备
粗磨、细磨、抛光在预磨机、磨抛机上进行。  

预磨机

带具磨抛机

腐蚀：
化学腐蚀
电解腐蚀
恒电位腐蚀等

最常用的为化学腐蚀方法

常用化学腐蚀方法

化学侵蚀操作

腐蚀剂的配制方法

常用腐蚀剂

样品制备过程注意事项

样品制备缺陷

。

怎样用间接法进行免疫荧光细胞化学染色

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 以下是具体的实验操作步骤：
（1）切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上，置于染色盒中保持一定的湿度，37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次，10min，用吸水吸去或吹干余留的液体。
（2）再滴加间接荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体等），同上步骤，染色30min，37℃，缓冲盐水洗两次10min，搅拌，缓冲甘油封固，镜检。
对照染色：
①抗体对照：用正常兔血清或人血清代替免疫血清，再用上法进行染色，结果应为阴性。
②抗原对照：即类属抗原染色，亦应为阴性。
③阳性对照。
  间接法中上述方法称双层法（Double Layer Method）。另一种称夹心法，即用未标记的特异性抗原加在切片上先与组织中之相应抗体结合，再用该抗原之荧光抗体重叠结合其上，而间接地显示出组织和细胞中抗体的存在，方法步骤如下：
①切片或涂片固定后，置于染色湿盒内。
②滴加未标记的特异性抗原作用切片于37℃，30min。
③缓冲盐水洗2次，每次5min，吹干。
④滴加特异性荧光抗体再用切片于37℃，30min。
⑤如③水洗。
⑥缓冲甘油封固，镜检。
　间接法只需制备一种荧光抗体可以检出多种抗原，敏感性较高，操作方法较易掌握，而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体（如麻疹）等的研究和检查，所以已被广泛应用于自身抗体和感染病人血清的试验。

金相检验常用检验标准

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金相检验有多种方法分别为：

• 金属显微组织检验方法（GB/T 13298-1991）
• 钢中非金属夹杂物含量的测定标准评级图显微检验法GB/T 10561-2005,
• 金属平均晶粒度测定方法GB/T 6394-2002,
• 低碳冷轧钢板铁素体晶粒度测定方法GB/T 4335-84,
• 钢的显微组织评定方法GB/T 13299-1991,
• 钢的脱碳层深度测定法（GB/T 224-1987）
• 钢中石墨显微评定方法（GB/T 13302-1991）
• 高碳钢盘条索氏体含量金相检测方法YB/T169-2000
• 钢的低倍组织及缺陷酸蚀检验法（GB/T 226-1991）
• 钢的硫印检验方法（GB/T 4236-1984）
• 钢材的断口检验法（GB/T 1814-1979）
• 钢材塔形发纹酸浸检验方法（GB/T 15711-1995）
• 结构钢低倍组织缺陷评级图（GB/T 1979-2001）
• 连铸钢板坯低倍组织缺陷评级图，YB/T4003-97
• 优质碳素结构钢和合金结构钢连铸坯低倍组织缺陷评级图YB/T153-99
后面我们会详细讲解每种方法。

晶体的解理及解理角

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晶体的解理及解理角
    晶体沿着一定方向裂开成光滑平面的性质称为解理。裂开的面称为解理面。解理面一般平行于晶面。许多晶体都具有解理，但解理的方向、组数（沿几个方向有解理）及完善程度不一样，所以解理是鉴定晶体的一个重要依据。解理具有方向性，它与晶面或晶轴有一定关系。

 
晶体的解理在光片中是一些平行或交叉的细缝（解理面与切面的交线），称为解理缝。根据解理发育的完善程度，可以划分为极完全解理（2.15a）、完全解理（2.15b）和不完全解理（2.15c）三类。有些晶体具有两组以上解理，可以通过测定解理角来鉴定晶体。

用相差显微镜做实验的步骤

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   相差显微镜的使用，较之普通显微镜术要复杂些，但亦易于掌握，按下列过程进行操作。如前所述，相差显微镜区别于普通光学显微镜的装置主要有相差物镜、转盘聚光器、合轴调中望远镜和绿色滤色镜四种部件。使用时将这些部件调换安装在同型号的普通光学显微镜上，即成为相差显微镜。 1．相差物镜的调换安装从物镜转换器上拆下普通物镜，旋入相差物镜，与普通目镜配套使用。 2．转盘聚光器的调换安装旋转聚光器升降螺旋，把普通明视场聚光器至最低位，旋松固紧螺丝，卸下聚光器。把转盘聚光器安放到相应位置上，旋紧固紧螺丝，转动聚光器升降螺旋，使聚光器升至最高位置。转盘聚光器的标示孔，朝向操作者。此时，转盘聚光器上面的聚光镜部分，进入光路；下面的环状光阑转盘，可视需要转动使用，把与物镜匹配的环孔旋入光路，使之处于转盘聚光镜下。 3．把绿色滤色镜放入镜座的滤色镜架上。转盘聚光器调换安装后，要进行合轴调中，使聚光器的光轴与显微镜的主光轴合一。其步聚如下：（1）把转盘聚光器的环状光阑调至“0”位，明视场照明的普通可变光阑进入光路。（2）旋转聚光器升降螺旋，聚光器升至最高位。（3）接通照明光源，使视场明亮。（4）把被检样品放到载物台上，用低倍（4×）物镜聚焦。（5）缩小镜座上的视场光阑开孔，至最小。（6）从目镜观察，在暗视场中可见一缩小的、明亮的、多角形的视场光阑图像。（7）转动转盘聚光器的两个调中杆，推动聚光器，把视场中的明亮的多角形的视场光阑图像，调至视场中央。（8）开放视场光阑至视场同大，视两者周边是否完全重合；否则，复用调中螺杆，使聚光器精神调中。

偏光显微镜结构图片

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正置偏光显微镜的安装
1、 显微镜的结构如图所示：
 

2、透射接头：将透射接头装上镜身，当止紧螺钉对准接头上的定位槽时，再将其止紧固定。
3、双目镜筒：将双目镜筒装在透射接头上，并用止紧螺钉止紧。
4、目镜：将目镜插入目镜筒内。
5、物镜：将载物台下降，4个物镜依次旋入转换器上，并务必旋紧到位。
6、聚光镜：检查聚光镜支架上的定位螺钉应定位于聚光镜底座上的定位槽内。
7、补色器：根据需要，将补色器插入补色器插口内。
8、滤色片：滤色片根据需要直接置于集光镜上。
9、移动尺：将移动尺安装在载物台上。
10、调节手柄：
需要调节物镜中心时，将调节手柄套入转换器上调节螺钉即可调节物镜中心。

相差显微镜的光路与成像

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   相差显微镜的照明光束，由转盘聚集器环状光阑的环状孔射入聚光镜，透射载物台上的被检样品，经样品后，入射光除透射的直线光外，同时产生衍射光。衍射光的振幅较小，相位滞后。直射光和衍射光进入物镜，前者由环状的共轭面、后者由较大的补偿面透过相板，前相互干涉造像。样品的影像由直射光（S）和衍射光（D）经干涉后的合成波（P）造成，即P=S±D；背景仅由直射光形成。由于直射光和衍射光两种光波的相位差异不同造成不同的反差效果，或明反差或暗反差不等视所用物镜的相板类别而定。成像光束由物镜射入目镜，在目镜的视场光阑处再次放大，并由出射光瞳射出目镜。

工业显微镜原理

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