上海光学仪器厂

复式显微镜的操作

技术支持

复式显微镜一般为单眼观察(比较高级的也有双眼同时观察)，放大倍率较解剖显微镜高很多，甚至于千倍。为研究生物学一项不可或缺的工具。

复式显微镜的原理

复式显微镜的镜头都是采用凸透镜来制造，所以有放大功能；放大倍率是目镜和物镜的乘积。因为光线来源是穿透式的，所以观察的材料要切的薄薄的，让光线穿过，才能进行观察，因此，通常我们必须要先将观察的材料做成切片标本。

 
制作标本的工具

盖玻片

载玻片

滴管

镊子

培养皿

刀片

新鲜标本的制作  (以头发为例)

(1) 取干净的载玻片一片

(2) 滴一滴水(不要太多！)

(3) 梳梳头发，在梳子上找一根掉发。

(4) 将头发放在水滴中央。

(5)盖玻片以45°慢慢盖上，避免产生太多气泡，影响观察。

(6) 如果发现盖玻片会浮动，就是水滴太多了，这时拿一张吸水纸靠在盖玻片旁边，将多余的水分吸掉。

(7) 如果气泡太多影响观察，或者是水太少，可以在盖玻片的一侧滴一滴水，在另一侧放吸水纸将水均匀的吸过去。

(8) 做好的标本若要暂时保存，则可以用指甲油将盖玻片的周围封起来。

新鲜标本的观察

1.把做好的玻片标本放在显微镜镜台的中央，中心点对准镜台中央的圆孔。

2.把玻片两端用玻片夹夹住固定。

3.物镜放入10x，旋转旋转盘，调整为最低倍的物镜(通常是4x)，此时放大倍率是40x。

4.光源：

(a)打开显微镜自己的灯源(若没灯源则调整反光镜的位置)

(b)调整光圈的大小，使光线适中。

(c)若是在高倍率下，可以外加灯照。

5.转动粗调节轮，直到玻片距离物镜约1㎝左右，转动细调节轮，直到看得清楚。

6.练习两眼同时张开，以左眼观察(这样右手可直接画图记录，所以若你是惯用左手，就用右眼观察)

7.在低倍镜下找到要观察的东西后，将要观察的东西移至视野中央。

8.更换高倍物镜观察，稍稍转动细调节轮，使视野清楚，如果换成高倍物镜就看不到所要观察的东西，则换回低倍镜下确定所观察的东西在视野中央。

9.光线太暗的处理：

(a)检查显微镜的灯源有没有开(或是反光镜有没有调好)

(b)光圈的大小

(c)标本是不是切得太厚不透光。

10.头发观察的结果：

标本的染色

1.生物的细胞通常是透明无色的，所以加入染色剂可以让我们观察的更清楚。

2. 常使用的染色剂是碘液和甲基蓝液。

3. 方法一：直接滴加一滴染色剂替代水。

4. 方法二：已做好的标本，则可以在盖玻片的一侧滴一滴染色剂，在另一侧放吸水纸将水均匀的吸过去。

金相材料分析与制样过程

技术支持, 未分类

          用金相显微镜如何观察不同金属组织及缺陷呢，以下这个详细制做过种是初学者们最好的学习参考。

一、 实验的主要目的
1.初步学会金相样品制备的基本方法
2.分析样品制备缺陷及防止措施
3.初步认识金相显微镜下的组织特征
4.学习数码照相技术

二、实验概述

   在要检测的材料或零件上截取样品，取样部位和磨面根据分析要求而定，截取方法视材料硬度选择，尺寸以适宜手握为宜。

最常用的取样方法

  粗磨

检验面整平

倒角

粗砂纸磨制

细磨
在一套不同粒度的砂纸上磨制，由粗到细。

更换砂纸时，磨痕方向与上道垂直，砂粒勿带入下道。

磨向要长、用力匀，样品与砂纸紧密接触

抛光：电解抛光、化学抛光、机械抛光、复合抛光等

抛光材料
抛光粉

抛光布

抛光液、抛光膏等

抛光机使用方法与注意事项
1.开机前，检查并放好抛光布，压布圈、环形盖。
2.按抛光机开关面版上的指示方向，打开开关或按钮，
 抛光盘转动平稳后进行抛光
3.抛光时，头要抬高，以防样品飞出伤人。
4.注意安全。

抛光方法

选择抛光粉
配制抛光溶液，比例大约为10—15%。
打开抛光机开关或按钮，
手握紧样品放在盘半径约一般处抛光。
边抛光边加入少量的抛光液。
注意若抛光液浓度不均匀，振动瓶子，数秒后加入。
一般的材料用Cr203绿粉、帆布粗抛光即可。
特殊样品要用Fe2O3红粉、丝绒细抛光。
样品表面抛好后，光亮如镜，干净干燥可腐蚀。
       否则重抛光或用水冲洗，用酒精冲洗，吹干腐蚀

 
其它磨抛设备
粗磨、细磨、抛光在预磨机、磨抛机上进行。  

预磨机

带具磨抛机

腐蚀：
化学腐蚀
电解腐蚀
恒电位腐蚀等

最常用的为化学腐蚀方法

常用化学腐蚀方法

化学侵蚀操作

腐蚀剂的配制方法

常用腐蚀剂

样品制备过程注意事项

样品制备缺陷

。

怎样用间接法进行免疫荧光细胞化学染色

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 以下是具体的实验操作步骤：
（1）切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上，置于染色盒中保持一定的湿度，37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次，10min，用吸水吸去或吹干余留的液体。
（2）再滴加间接荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体等），同上步骤，染色30min，37℃，缓冲盐水洗两次10min，搅拌，缓冲甘油封固，镜检。
对照染色：
①抗体对照：用正常兔血清或人血清代替免疫血清，再用上法进行染色，结果应为阴性。
②抗原对照：即类属抗原染色，亦应为阴性。
③阳性对照。
  间接法中上述方法称双层法（Double Layer Method）。另一种称夹心法，即用未标记的特异性抗原加在切片上先与组织中之相应抗体结合，再用该抗原之荧光抗体重叠结合其上，而间接地显示出组织和细胞中抗体的存在，方法步骤如下：
①切片或涂片固定后，置于染色湿盒内。
②滴加未标记的特异性抗原作用切片于37℃，30min。
③缓冲盐水洗2次，每次5min，吹干。
④滴加特异性荧光抗体再用切片于37℃，30min。
⑤如③水洗。
⑥缓冲甘油封固，镜检。
　间接法只需制备一种荧光抗体可以检出多种抗原，敏感性较高，操作方法较易掌握，而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体（如麻疹）等的研究和检查，所以已被广泛应用于自身抗体和感染病人血清的试验。

金相检验常用检验标准

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金相检验有多种方法分别为：

• 金属显微组织检验方法（GB/T 13298-1991）
• 钢中非金属夹杂物含量的测定标准评级图显微检验法GB/T 10561-2005,
• 金属平均晶粒度测定方法GB/T 6394-2002,
• 低碳冷轧钢板铁素体晶粒度测定方法GB/T 4335-84,
• 钢的显微组织评定方法GB/T 13299-1991,
• 钢的脱碳层深度测定法（GB/T 224-1987）
• 钢中石墨显微评定方法（GB/T 13302-1991）
• 高碳钢盘条索氏体含量金相检测方法YB/T169-2000
• 钢的低倍组织及缺陷酸蚀检验法（GB/T 226-1991）
• 钢的硫印检验方法（GB/T 4236-1984）
• 钢材的断口检验法（GB/T 1814-1979）
• 钢材塔形发纹酸浸检验方法（GB/T 15711-1995）
• 结构钢低倍组织缺陷评级图（GB/T 1979-2001）
• 连铸钢板坯低倍组织缺陷评级图，YB/T4003-97
• 优质碳素结构钢和合金结构钢连铸坯低倍组织缺陷评级图YB/T153-99
后面我们会详细讲解每种方法。

显微镜内发霉怎么办呢？

常见问题

今天有个客户咨询我问显微镜发霉了怎么办？他说很久没用了，放在地下室的库房里了，今天忽然要用打开之后发现镜子看不清，像是发霉了。我们不止一次提醒显微镜用户，显微镜是精密的光学仪器，在不用的时候要放在通风好，干净，不潮，无腐蚀的环境中，包括在产品使用说明书也有维护说明。可是有些客户就是不注重显微镜的保养，等发霉才着急。这样是不可取的。本身对镜子也是有损坏的。所以再次提醒大家，显微镜在不用的时候一定要放在通风，干燥，无腐蚀的环境中。如果出现了发霉情况，那首先看您是显微镜的哪部分发霉。如果是观察筒或者聚光镜等部位，在维修站是可以除霉的。比如说直接打我们的销售电话：400 001 5866 转售后部门，由于显微镜的内部除霉需要工具和特殊的除霉剂，并且除霉后所有拆过的部件都要进行光路校正，所以最好是送到维修站内进行，不要自己随便拆卸。

视频显微镜是什么?

常见问题

　　将传统的显微镜与摄象系统，显示器或者电脑相结合，达到对被测物体的放大观察的目的。
  视频显微镜最早的雏形应该是相机型显微镜，将显微镜下得到的图像通过小孔成象的原理，投影到感光照片上，从而得到图片。或者直接将照相机与显微镜对接，拍摄图片。随着CCD摄像机的兴起，显微镜可以通过其将实时图像转移到电视机或者监视器上，直接观察，同时也可以通过相机拍摄。80年代中期，随着数码产业以及电脑业的发展，显微镜的功能也通过它们得到提升，使其向着更简便更容易操作的方面发展。到了90年代末，半导体行业的发展，晶圆要求显微镜可以带来更加配合的功能，硬件与软件的结合，智能化，人性化，使显微镜在工业上有了更大的发展。

CCD摄像机的工作方式　

常见问题

　被摄物体的图像经过镜头聚焦至CCD芯片上，CCD根据光的强弱积累相应比例的电荷，各个像素积累的电荷在视频时序的控制下，逐点外移，经滤波、放大处理后，形成视频信号输出。视频信号连接到监视器或电视机的视频输入端便可以看到与原始图像相同的视频图像。 CCD:就像是人的眼睛，把光影像转成电子讯号，靠的就是上头的感光点，每一点就像一颗太阳能电池，被光照到后会产生电能，依照光的强度不同，会产生不同大小的电能。 V-Driver：CCD里头每一点被光照到产生电能，那如何取出来？就是靠这颗V-DRIVER，它会产生不同的脉波，把CCD每点的讯号”挤”出来。 CDS/AGC：CCD挤出来的讯号，在这颗晶片内做”修整”，送进D.S.P. 到以上阶段，记住！全都是模拟讯号。 D.S.P：重头戏来了，D.S.P 是 Digital Signal Processor 的缩写，也就是数位讯号处理器，可是不是说CDS/AGC出来是模拟讯号吗？因此DSP里头包了一颗Decoder (A/D Converter， 模拟数位转换器)，先把模拟转成数位，再做一大堆的运算(颜色，亮度，白平衡…..)，然后再把数位转模拟(Encoder，也是包在DSP里头)，就是视频输出了。挺复杂的，我们所谓的方案就是以用那颗DSP来说的)。 T.G:Timing Gen:这是在控制整个处理过程的快慢用的，现在一般看不到了，都包在DSP内了。简单解释了一下，我们会发现一件事，其实摄像机内大部份还是模拟电路。

关于CCD摄像机

常见问题

        60年代末期由贝尔试验室发明,开始是作为一种新型的PC存储电路，很快便发现CCD具有许多其他潜在的应用，包括信号和图像（硅的光敏性）处理。如今，CCD的应用领域已经今昔对比，在我们熟习的数码相机上，他扮演着举足轻重的作用。他接收透过镜头的光，并将光讯号转换为电信号，再由模拟数字转换器（A/D）将这些电信号转变成数码相机能识别的数字信号，这些数字信号最后就会还原为我们最终期待的照片图像。在像素数一样的情况下，CCD尺寸越大单位像素就越大。这样，单位像素可以收集更多的光线，因此，理论上可以说有利于提高画质。CCD片的大小与摄像效果与密切的关系，CCD片越大在低照度下表现的越比较好，画面更清晰明亮。CCD上感光组件的表面具有储存电荷的能力，并以矩阵的方式排列。当其表面感受到光线时，会将电荷反应在组件上，整个CCD上的所有感光组件所产生的信号，就构成了一个完整的画面。在安全防范系统中，图像的生成当前主要是来自CCD摄像机，CCD是电荷耦合器件（charge coupled deice)的简称，它能够将光线变为电荷并将电荷存储及转移，也可将存储之电荷取出使电压发生变化，因此是理想的摄像机元件，以其构成的CCD摄像机具有体积小、重量轻、部受磁场影响、具有抗震东和撞击之特性而被广泛应用。 CCD是Charge Coupled Device(电荷耦合器件)的缩写，它是一种半导体成像器件，因而具有灵敏度高、抗强光、畸变小、体积小、寿命长、抗震动等优点。

如何将明视场显微镜改成暗视野显微镜

常见问题

     明暗场显微镜在生物学教学和科研中的用途是十分广泛的。我们在教学中, 应用普通光学显徽镜改成暗视野显微镜, 改装后的效果与暗视野显徽镜几乎相同。具体改制方法如下。将明视野显微镜按正常操作程序进行调节, 使视野明亮。取下目镜, 通过镜筒观看视野, 同时调节光圈, 使之与视野同样大小。倾斜镜臂, 用口规或尺子在聚光器「量出光圈直径的大小。用一块黑色纸做一个与光圈直径相同或稍大一些的圆形挡光片, 贴在滤光镜片中央,置于滤光镜片支架上。通过镜筒观看视野, 并调节黑色
挡光片使之位于视野中央, 遮住视野中心的光线。然后放上目镜, 开大光圈。这样便可进行暗视野观察。改制的关键是黑色挡光片直径的大小必须与光圈的直径相一致或稍大一些。每换一物镜就籍重调一次,并另制一与之光圈直径大小相一致的挡光片。